1. 預(yù)期用途

這些材料代表國際輸血協(xié)會(huì)/國際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì) (ISBT/ICSCH) 分發(fā)。

任何酶制劑的整體性能是其蛋白水解效力及其使用方法的產(chǎn)物。特定酶制劑的功效應(yīng)通過真陽性反應(yīng)的敏感性和在推薦的技術(shù)中實(shí)現(xiàn)的假陽性反應(yīng)的敏感性來判斷。木瓜蛋白酶批次 92/658 相當(dāng)于以前的木瓜蛋白酶批次 94/676分發(fā)用于此用途。使用參考抗 D 91/562 和六種惰性血清（2 組 A、2 組 B 和 2 組 O )，在兩階段參考技術(shù)中收集至少四個(gè) O R1r 組血液樣本?？?D 91/562 不能用作血型試劑。

2. 注意

NIBSC92/658木瓜蛋白酶制劑用于抗D標(biāo)準(zhǔn)品 不適用于人類食物鏈中的人類或動(dòng)物。

91/562 制劑含有人源材料，經(jīng) PCR 檢測發(fā)現(xiàn) HBsAg、HIV 抗體、HCV 抗體和 HCV RNA 均為陰性。制劑 92/658 不含人源材料。與所有生物來源的材料一樣，這種制劑應(yīng)被視為對健康有潛在危害。應(yīng)根據(jù)您自己實(shí)驗(yàn)室的安全程序使用和丟棄它。此類安全程序應(yīng)包括戴防護(hù)手套和避免產(chǎn)生氣溶膠。打開安瓿或小瓶時(shí)應(yīng)小心謹(jǐn)慎，以免割傷。

3. 單元

不適用

4. 內(nèi)容

生物材料原產(chǎn)國：英國。

5. 存儲

將未開封的安瓿瓶存放在 -20oC 或以下。

請注意：由于凍干材料固有的穩(wěn)定性，NIBSC 可以在環(huán)境溫度下運(yùn)輸這些材料。

6. 開瓶指南

輕輕敲擊安瓿以收集底部（標(biāo)記）端的材料。確保在嘗試打開之前，用金剛石或碳化鎢頂端的玻璃刀銼或其他合適的工具在頸部狹窄部分對安瓿進(jìn)行全面刻痕。將安瓿瓶放入安瓿瓶開啟器中，將分?jǐn)?shù)定位在“A"位置；如下圖所示。用布或幾層薄紙圍繞安瓿。握住安瓿瓶和支架并在“B"點(diǎn)擠壓。安瓿瓶會(huì)突然打開。注意避免割傷和彈射玻璃碎片進(jìn)入眼睛。小心不要從安瓿瓶中丟失任何材料，并且不要讓玻璃落入安瓿瓶中。安瓿瓶開啟裝置的側(cè)面視圖包含一個(gè)準(zhǔn)備打開的安瓿瓶。 “A"是得分標(biāo)記，“B"是施加壓力的點(diǎn)。

7. 材料的使用

NIBSC92/658木瓜蛋白酶制劑用于抗D標(biāo)準(zhǔn)品 在重新配制之前，不應(yīng)嘗試稱量凍干材料的任何部分

a) 凍干材料的重構(gòu)

按如下方法重新配制每個(gè)安瓿中的全部內(nèi)容物：- 木瓜蛋白酶 (92/658) – 加入 2ml 無緩沖的 0.15M NaCl Anti-D (91/562) – 加入 1ml 蒸餾水/去離子水 將安瓿置于室溫 (19- 25oC) 15 分鐘，不要搖晃。然后，輕輕攪拌后，重構(gòu)的材料應(yīng)在 2-6 oC 下儲存并在 24 小時(shí)內(nèi)使用。

b) 從至少四個(gè)合并的 O R1r 組血樣中等比例制備一池經(jīng)過洗滌的濃縮紅細(xì)胞。

c) 將兩份復(fù)溶的參考木瓜蛋白酶制劑 (92/658) 與一份濃縮紅細(xì)胞混合，并在 37oC 下孵育 15 分鐘。

d) 用磷酸鹽緩沖鹽水（0.15M NaCl 中的 10mM pH 7.2 磷酸鹽緩沖液）洗滌處理過的細(xì)胞 3 次。在 PBS 中將處理過的細(xì)胞重新懸浮至 3% (v/v)。

e) 在含有 2% (w/v) 牛血清白蛋白的 PBS 中制備從純到 1/512 的重組參考抗 D 91/562 的加倍稀釋系列。

f) 在玻璃管中混合一體積 3% 處理過的細(xì)胞與一體積參考抗 D 和一體積 PBS。對 Anti-D 的每次稀釋重復(fù)此操作。

g) 對于六種惰性血清中的每一種（A 組 2 個(gè)，B 組 2 個(gè)，O 組 2 個(gè)），將 1 體積 3% 處理過的細(xì)胞與 1 體積惰性血清和 1 體積 PBS 混合。

h) 在 37oC 下孵育 15 分鐘。

i) 以 500rcf 離心管 15 秒。

j) 輕輕重懸細(xì)胞并評估凝集程度宏觀上。

k) 平行地，用抗 D 的滴定系列測試匯集的細(xì)胞91/562 在測試方法中使用測試酶。

l) 評分反應(yīng)等級如下：- 評分觀察

C 12 細(xì)胞按鈕在一個(gè)叢中

+++ 10 個(gè)細(xì)胞按鈕脫落成幾個(gè)大塊

++ 8 細(xì)胞紐扣脫落成許多小團(tuán)塊

+ 5 個(gè)細(xì)胞按鈕脫落成顆粒狀但明確的團(tuán)塊

(+) 3 單元格按鈕脫落變成細(xì)小的顆粒

0  0 細(xì)胞按鈕脫落成單獨(dú)的團(tuán)塊

m) 將每次滴定的反應(yīng)分?jǐn)?shù)相加，并將每種酶的惰性血清反應(yīng)分?jǐn)?shù)相加。