SRM3655溶液中的聚糖標準品 (美國NIST)主要用作測量酶促釋放的 N-連接聚糖的校準標準。 SRM 3655 的潛在應用包括分析技術的基準測試和可比性，作為確保系統(tǒng)適用性和分析方法驗證的材料。該材料還可用于對內(nèi)部校準器或控制材料進行賦值。SRM 3655 由十三 (13) 種通常與單克隆抗體治療相關的聚糖水溶液組成。每種溶液都含有已知質(zhì)量分數(shù)的純化的游離還原聚糖。

規(guī)格：

一個 SRM 3655 單元由 13 個 0.5 mL 小瓶組成，每個小瓶含有大約 0.2 mL 冷凍溶液。

聚糖的認證值：

表 1 中提供的 13 種聚糖的認證質(zhì)量分數(shù)和估計不確定度基于溶液的重量法制備以及綜合純度分析獲得的結果，以及使用液相色譜法確定的分析結果-串聯(lián)質(zhì)譜 (LC-MS/MS) 分析。 NIST 認證值是 NIST 最有信心的值，其準確性在于所有已知或可疑的偏差來源都已被調(diào)查或考慮在內(nèi) [1]。數(shù)值以質(zhì)量分數(shù)單位（微克/克）提供，為方便用戶，提供物質(zhì)濃度（微摩爾/升）。使用 22 °C 時的水密度 (0.9977 g/mL ± 0.00083 g/mL) [2] 和平均值，相對每個聚糖的分子量和不確定性 [3]。

來源、準備和分析

來源和制備：用于制備 SRM3655溶液中的聚糖標準品 (美國NIST)的純化聚糖粉末是在 G.J. 實驗室通過化學酶合成方法 [9-13] 生產(chǎn)的。烏得勒支大學（荷蘭烏得勒支）和喬治亞大學復雜碳水化合物研究中心（喬治亞州雅典）的恩賜。

聚糖粉末在 NIST 的純水中通過重量分析法重構，混合均勻，然后分裝。 SRM 3655 的單位在 -70 ℃ 以下冷凍保存直至使用。

分析：SRM 3655 價值分配中的所有分析均在 NIST 進行。

通過 LC-MS/MS 分析測量聚糖質(zhì)量分數(shù)：使用 LC-MS/MS 分析實現(xiàn)了 SRM 3655 中聚糖質(zhì)量分數(shù)的定量測量。在三重四極桿質(zhì)譜儀上使用正極性的多反應監(jiān)測 (MRM) 分析單獨檢測聚糖。使用多孔石墨化碳分析色譜柱實現(xiàn) LC 分離。使用 50 mmol/L NH4HCO2（流動相 A）和 0.1% (v/v) 甲酸的乙腈 (ACN) 溶液（流動相 B）從固定相中洗脫聚糖。測量值校準到聚糖標準品，其純度和質(zhì)量分數(shù)在 NIST 進行了評估。將市售的棉子糖材料按重量計加標到樣品和校準溶液中，并用作 LC-MS/MS 漂移的內(nèi)部對照。 LC-MS/MS 分析在三到五個獨立組中進行，在不同的日子里重復六到七次。每個聚糖的兩個片段化轉(zhuǎn)變被歸一化為內(nèi)標信號。對兩種色譜分離的異頭異構體（α 和 β）進行了標準化。