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轉(zhuǎn)基因DAS-44406-6大豆ERM-BF436b定量檢測(cè)法

發(fā)布時(shí)間: 2022-12-08  點(diǎn)擊次數(shù): 527次

轉(zhuǎn)基因DAS-44406-6大豆ERM-BF436b僅用于食品和飼料中轉(zhuǎn)基因DAS-44406-6大豆的鑒定和定量方法的校準(zhǔn)或質(zhì)量控制。干的CRM粉具有吸濕性。

轉(zhuǎn)基因DAS-44406-6大豆ERM-BF436b是五種DAS-44406-6大豆粉末認(rèn)證參考物質(zhì)(CRMs)之一,含有不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)的轉(zhuǎn)基因大豆。ERM-BF436b是由陶氏農(nóng)業(yè)科學(xué)公司(DAS,Oxon,UK)提供的轉(zhuǎn)基因DAS-44406-6大豆的全種子生產(chǎn)而成。


熒光PCR和數(shù)字PCR法檢測(cè)轉(zhuǎn)基因DAS-44406-6品系大豆:

目的:建立實(shí)時(shí)熒光聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chain reaction,PCR)檢測(cè)轉(zhuǎn)基因DAS-44406-6品系大豆的定性檢測(cè)方法和使用數(shù)字PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)基因DAS-44406-6品系大豆的定量檢測(cè)方法。

方法:針對(duì)轉(zhuǎn)基因DAS- 44406-6大豆品系,進(jìn)行5’-RACE,測(cè)定該品系轉(zhuǎn)基因大豆外源片段與大豆染色體重組的邊界序列,并根據(jù)該邊界 序列設(shè)計(jì)引物和探針。使用23 種非DAS-44406-6品系轉(zhuǎn)基因植物作為陰性對(duì)照測(cè)試實(shí)時(shí)熒光PCR引物和探針的特異 性,以DAS-44406-6品系樣品制備6 個(gè)含量梯度的樣品進(jìn)行檢測(cè)低限實(shí)驗(yàn)。使用數(shù)字PCR技術(shù)進(jìn)行定量檢測(cè),并確 定定量檢測(cè)的低限。

結(jié)果:建立的轉(zhuǎn)基因DAS-44406-6大豆品系的實(shí)時(shí)熒光PCR特異性檢測(cè)方法品系鑒定特異性較 強(qiáng),實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)方法的檢測(cè)低限在模板DNA濃度為100 ng/反應(yīng)時(shí),為0.01%的轉(zhuǎn)基因大豆含量,約為16.6 個(gè) 拷貝的DAS-44406-6基因組DNA;數(shù)字PCR檢測(cè)方法的檢測(cè)低限在模板DNA濃度為0.5 ng/反應(yīng)、轉(zhuǎn)基因大豆含量為 1%時(shí),相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.7%。因此,建立的轉(zhuǎn)基因DAS-44406-6大豆品系實(shí)時(shí)熒光PCR和數(shù)字PCR特異性檢測(cè)方法 符合轉(zhuǎn)基因檢測(cè)的要求。

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